厌氧培养箱操作与使用指南

一、操作准备

1、设备应置于环境温度低于（设定温度-5℃）的区域，推荐室温25℃。

2、连接电源、气源并启动控温仪，设定温度（如37±1℃）及湿度（45%-60%）。

3、检查箱体密封性、气体管道通畅性及压力表状态。

4、内腔紫外线灭菌30分钟，放置钯粒（1000g）、干燥剂（500g）及美兰指示剂。

5、准备无菌手套、培养基及混合气体（N₂:H₂:CO₂=85%:10%:5%）。

二、厌氧环境形成流程

1、通过氮气三次置换操作室内空气：充氮→抽真空→重复至氧含量极低。

2混合气体置换：以10ml/min流量输入混合气，重复2-3次，配合钯粒催化除氧。

3、通过美兰指示剂变白确认厌氧状态达标。

4、通过传输舱或取样室放入样本：

(1) 关闭内外门，抽真空至66kPa后注入氮气至常压，重复三次；

(2) 最后一次置换使用混合气体，确保取样室无氧残留。

5、操作室手套口直插取放培养皿，避免长时间敞开破坏厌氧环境。

三、运行与终止

1、每日检查美兰指示剂颜色，异常时需重新置换气体。

2、维持混合气补入（10ml/min）以抵消微量氧渗透。

3、关闭电源、气阀，排空残留气体后清洁内腔。

4、取出废料并消毒，定期更换钯粒与干燥剂（建议每周一次）。

四、注意事项

1、安全规范‌：禁止明火，定期检测气体浓度防泄漏，操作全程佩戴手套。

2、设备维护‌：每月清洁箱体表面，检查密封圈老化情况，校准温控系统。

3、应急处理‌：遇断电需立即关闭气阀，重启后重新置换气体环境。