厌氧培养箱标准操作规范

适用：实验室厌氧微生物接种、传代、培养；含开机、进样、样品操作、培养、出样、关机、维护、安全与记录，可直接用于实验室体系文件。

标准混合气配比：N₂ 85%、H₂ 10%、CO₂ 5%；目标氧浓度＜0.1%，常用培养温度 35～37℃

一、开机前检查

环境：放置平稳、通风，避开阳光直射、热源；环境温度 10～30℃，远离易燃易爆物；设备可靠接地。

气源：氮气瓶、混合气瓶固定牢固，减压阀输出压力调至 0.05～0.08 MPa；管路无老化，肥皂水检漏，无气泡。

耗材检查 

钯粒（钯催化剂）：提前活化，无受潮、无中毒；作用：H₂+ 残余 O₂催化生成水。

干燥剂（硅胶）：干燥，用于除湿。

厌氧指示剂（美蓝 / 刃天青）：确认有效；有氧时变蓝 / 变红，无氧保持无色。

乳胶手套：无裂纹、发黏、针孔；密封圈完好。

腔体预处理：清空箱体，75% 乙醇擦拭内腔；开启紫外灭菌 20～30 min，灭菌后关闭紫外再通气。

电气：电源线完好，无破损；真空泵油位正常。

二、开机与建立厌氧环境

打开设备后部总电源，启动控制面板，设置目标温度（37℃常规），启动加温。

将钯粒、干燥剂、厌氧指示剂放入操作室内；关闭传递舱（气闸）内、外门。

腔体置换（自动款直接启动 “厌氧启动"；手动款） 

第一轮：抽真空 → 充氮气，平衡；

第二轮：抽真空 → 充氮气，平衡；

第三轮：抽真空 → 充标准厌氧混合气；

多次循环直至氧浓度达标、指示剂保持无色，箱体进入稳定厌氧状态（一般 3～5 轮置换）。

待温度、氧浓度稳定，方可进行样品操作。

三、样品、器皿进出传递舱（气闸）【重点】

原则：内门、外门严禁同时打开，防止氧气大量冲入，破坏厌氧环境。

进箱（物品送入操作室）

确认操作室内门关闭 → 打开传递舱外门，放入平板、试管、耗材；高温液体、干冰禁止入舱。

关闭外门，启动气闸自动抽充置换程序（抽真空→充氮→混合气置换）。

置换周期完成、气闸氧达标后，再打开内门，戴手套将物品移入操作室。

立刻关闭内门。

出箱（样品取出）

内门打开，将待取出样品放入传递舱，关闭内门。

启动气闸置换，完成后打开外门取出样品，随即关闭外门。

四、箱内样品操作与培养

操作全程动作轻柔，避免划破乳胶手套；减少不必要的开门、频繁进出传递舱。

接种、分菌、转种在箱内无菌操作；避免洒落培养基、菌液，污染腔体。

放好培养物，记录放入时间、编号；关好培养仓门。

运行巡检（每班次）

温度、氧浓度、压力；厌氧指示剂颜色；

气瓶压力，预判余气，及时备瓶；

有无漏气、报警（超温、高氧、气压异常），报警优先停止操作、排查。

若短暂停电 / 断气，尽量不开启箱体；短时间（数小时）多数箱体可维持厌氧；长时间失氧，样品建议作废重接种。

五、培养结束、正常关机（日常使用）

如果后续还要频繁使用，可只取出样品、保持箱体厌氧待机，不用*底换气关机。

全部样品取出，清理残留培养基、废液残渣，擦拭内腔。

倒掉冷凝水、水盘积水。

短期停用：关闭加温、照明，维持厌氧待机，关闭气瓶总阀。

长期停机（＞7 天） 

取出钯粒、干燥剂；

多次抽充空气，把箱内氢气*全置换干净（防爆）；

关闭气源、设备总电源；手套口可加盖保护。

六、日常维护与周期维护

每日：清洁腔体；检查指示剂、压力、有无泄漏；清理洒落物。

每周：手套完整性检漏；检查密封圈；排放冷凝水；查看真空泵油。

每月：管路接头检漏；更换 / 活化钯粒（钯粒受潮、中毒后除氧失效，一般 160～180℃烘干活化）；更换失效干燥剂；更换进气过滤器。

每季度 / 按厂家：真空泵换油；校准温度、氧传感器；检修电磁阀、气路。

消毒：优先 75% 乙醇擦拭；慎用强氧化剂、含氯消毒剂长期接触密封圈，会加速老化。

七、安全规范（氢气防爆）

混合气含氢气，实验室必须通风良好，严禁明火、电火花，禁止在设备旁抽烟。

闻到刺鼻 / 漏气气味：立刻关闭气瓶总阀，停机，开窗通风，禁止开关电器，排查漏点。

钢瓶固定，使用气瓶链；更换钢瓶前先关闭瓶阀，释放管路余压，再接减压阀。

不得私自修改设备真空、充气参数，防止负压压坏有机玻璃腔体。

八、记录要求

建立使用台账，记录：使用日期、操作人员、样品信息、温度、氧浓度、气瓶压力、异常情况、维护活化记录。

九、常见禁忌

1.内外门同时开启；

2.把高温液体、干冰、大量挥发性溶剂直接送入；

3.钯粒沾水、接触硫化氢等易中毒物质；

4.在厌氧箱内焚烧、明火灭菌；

5.氧超标情况下接种厌氧菌株