厌氧培养箱使用方法

厌氧培养箱的使用需严格按照标准操作流程进行，以确保箱内维持稳定、可靠的无氧环境，保障厌氧微生物的正常培养。以下是系统化的操作步骤与关键注意事项：

一、操作前准备

环境检查‌

确保设备放置平稳，周围通风良好，避免强电磁干扰。检查电源连接正常，气源（氮气、氢气、二氧化碳混合气）压力充足（通常≥2MPa），气体纯度≥99.99%。

耗材与配件准备‌

准备钯粒（约1000g）和干燥剂（约500g）用于除氧与控湿

放入美兰或刃天青等厌氧指示剂监测氧气残留

检查手套密封性，准备好无菌培养皿、预还原培养基等实验器具

气密性检测‌

关闭所有舱门，启动真空泵抽至0.08 MPa，关闭阀门后观察5分钟，压力变化应≤0.01 MPa，否则需用肥皂水排查漏点。

二、厌氧环境建立流程

氮气置换（3次循环）‌

充入氮气使操作室手套鼓起，随后抽真空至66 kPa以上

重复该过程3次，逐步降低氧气浓度

混合气体置换（2–3次）‌

切换至混合气体（N₂ 85%、H₂ 10%、CO₂ 5%）

以每分钟10 ml左右的流量通入，配合抽真空完成2–3次循环

最后一次置换使用混合气，确保取样室无氧残留

催化除氧‌

打开钯粒除氧剂电源，利用钯催化剂将残余氧气与氢气反应生成水，实现深度除氧。1小时后观察美兰指示剂，若不变色（无氧状态）则达标。

紫外线灭菌‌

关闭操作室，开启紫外灯照射30分钟，对内腔进行灭菌处理。

三、样品转移与培养

样品传入操作室‌

打开取样室外门，放入菌种后关闭

对取样室执行3次“抽真空→充氮气"置换，最后一次充入混合气体

检查压力平衡后打开内门，将样品移入主操作室

设置培养参数‌

根据实验需求设定温度（通常为35–37℃）和湿度（建议45%–60%）

温度可任意调节并保持恒定

日常监控‌

每日观察美兰指示剂颜色，异常时需重新置换气体

长期运行需持续补入微量混合气体（约10 ml/min），抵消微量氧渗透

四、使用后处理与维护

清洁消毒‌

使用75%乙醇或专用消毒剂擦拭内壁、手套袖套及传递舱，防止污染。

耗材更换‌

每连续运行一天更换一次钯粒与干燥剂

钯催化剂每3–6个月再生或更换（160℃烘烤2小时可活化）

气体与电源管理‌

实验结束后关闭气瓶阀门，排空管路余气；长期不用时每周开机一次维持干燥。